阿斯巴甜和阿力甜复合使用可以协同增效、降低成本、改善口感、提高甜味的稳定性，不但甜度高、味质好，且储存期长、无热量，是常用的食品甜味剂。但若使用过量可能会出现人体肝脏被破坏、神经系统紊乱、致癌等不良影响。
外标法需要绘制标准曲线，标准液和待测液要分开进行测定，不能实现同时、同步分析，容易受到仪器条件以及环境因素的影响。内标法需要先用标准液求得各待测组分和内标物的相对校正因子，代入相应公式计算结果。对复杂样品，有时很难找到合适的内标物，也无法确定样品中是否不含所用的内标物，很难及时开展工作。归一化法要求样品中所有组分全部出峰、并产生测定信号，样品中各组分的相对含量之和应为%。要求知道各组分的校正因子，操作较为繁琐。这些测定方法操作繁杂，需测定空白溶液、绘制标准曲线或进行复杂计算，工作效率较低。
混标加样增量法是一种新型分析技术，克服了上述分析方法的不足，只需取2份完全相同的阿斯巴甜和阿力甜混合标准液，依次加入不同体积的试液，混匀后在同一条件下进行测定。郑州科技学院食品科学与工程学院（郑州市食品安全快速检测重点实验室）的高向阳和张芳以同一保留时间下组分色谱峰信号是否有增加进行定性分析，以混合标准液加样后色谱峰信号值代入公式进行定量分析，无需绘制标准曲线和测定空白溶液，具有成本低、工作效率高、测定速度快、干扰少、准确度高、适用范围广等突出优点。
1条件的选择
1.1色谱流动相的选择用不同比例梯度的甲醇和水作为流动相，阿斯巴甜和阿力甜能很好得到分离，最佳流动相为甲醇-水（40∶60，V/V），流速为0.8mL/min。
1.2波长的选择
基于阿斯巴甜和阿力甜在紫外光区的检测灵敏度，选择nm波长检测，确定阿斯巴甜和阿力甜的保留时间如图1所示，结果表明，阿斯巴甜与阿力甜出峰较好。
2加样增量法色谱图比较分析
取2个相同的离心管A、B，各加10μg/mL阿斯巴甜和阿力甜混合标准液50μL，再向离心管A中加入μL可口可乐待测试液，向离心管B中加入μL可口可乐待测试液，均定容至1.00mL，混匀后进行色谱分析。由图2可知，阿斯巴甜和阿力甜在各自保留时间下，加入不同体积的可口可乐试液后，各自的峰高均有增加，保留时间允许的误差范围内tA1＝tB1，hB1-hA1＞0，则可口可乐中含有阿斯巴甜，tA2＝tB2，hB2-hA2＞0，则可口可乐中含有阿力甜，以此进行定性分析。
由图2A可得，阿斯巴甜保留时间tA1为3.min，峰高hA1为10.mAU，阿力甜保留时间tA2为6.min，峰高hA2为6.mAU；如图2B所示：阿斯巴甜保留时间tB1为3.min，峰高hB1为11.mAU，阿力甜保留时间tB2为6.min，峰高hB2为7.mAU。
3加样增量法测定结果及精密度
结果显示，5种试样测定的相对标准偏差（RSD）均小于5%。由色谱峰高值，可简便、快速计算出食品中待测组分的含量，也可用峰面积数据代入相应公式计算。
4样品的检出限和定量限结果
由GB.—《食品中阿斯巴甜和阿力甜的测定》的检出限和定量限可知，碳酸饮料、液态乳饮料中的阿斯巴甜和阿力甜的检出限为1mg/kg，定量限为3mg/kg，巧克力制品、水果及其制品、固体饮料及其制品中的阿斯巴甜和阿力甜的检出限为5mg/kg，定量限为15mg/kg。该方法的检出限和定量限均低于国家食品安全标准中的检出限和定量限。
5加标回收率结果
以酸奶测定加标回收率，分别对样品进行3个水平的加标回收，每个水平做6次平行测定，检验无可疑值后，取峰高平均值计算。结果显示，酸奶中阿斯巴甜的回收率为90.5%～98.3%，阿力甜的回收率为93.2%～95.8%。由于各组分在色谱柱中得到了充分分离，互不干扰，尤其适用于多组分的色谱定性和定量分析，由各组分依次出现的色谱峰信号值，可快速计算各组分含量和回收率。
6国标法对比实验
6.1国标法标准曲线的回归方程
按国标法规定的波长和色谱条件，以50.00、45.00、40.00、35.00、30.00、25.00、20.00、10.00、5.00、2.50、1.00μg/mL和0.50μg/mL的标准混合使用液各进样5μL测定，以组分质量浓度为横坐标，以峰高为纵坐标绘制标准曲线，得出阿斯巴甜的回归直线方程为Y＝4.x-1.9，阿力甜的回归直线方程为Y＝2.x-1.，相关系数r均为0.。
6.2国标法测定结果
按国标法操作步骤，各样品均进行6次平行测定，检验无可疑值后，取平均值报告。国标法采用外标法绘制标准曲线并测定样品中待测物质的含量。结果表明，阿斯巴甜和阿力甜含量最低的为酸奶，最高的为巧克力，RSD前者为0.7%～4.8%，后者为0.48%～2.2%。
7显著性检验结果
以酸奶为样品，样品前处理依据GB.—，用该法和国标法进行对照实验，各样品进行6次平行测定，结果显示，F值＜F0.05＝5.05，表明混标加样增量法与国标法之间不存在显著的偶然误差；t值＜t0.05＝2.23，表明混标加样增量法与国标法间也不存在显著的系统误差，结论的置信度为95%。
结论
方法所用标准溶液、待测液和试剂量少，成本低，操作简单，无需绘制标准曲线、无需测定空白和复杂计算，可快速获得分析结果。实现了标准溶液和试液在同溶液背景、同体系、同方法、同仪器、同条件、同步操作下进行同时定性、定量分析，准确度得到保障和提升，有一定的创新性。由于各组分在色谱柱中得到了充分的分离，相互之间不干扰，尤其适用于色谱多组分的同时定性和定量分析。与国标法对照，用于测定食品中的阿斯巴甜和阿力甜，经检验无显著性差异。
该法不仅适用于液相色谱法，也适用于气相色谱、离子色谱、超临界流体色谱、毛细管电泳色谱法，以及化学发光、分子荧光、磷光分析法、生物发光分析法、原子发射光谱、原子吸收光谱、原子荧光光谱和紫外、可见分子吸收光谱等诸多分析技术。不仅适用于阿斯巴甜和阿力甜的测定，也适用于其他物质诸多组分的测定。根据所用方法不同，测定信号可以是色谱峰峰高、色谱峰峰面积、相对发光强度、吸光度等，可行性和推广应用领域十分广泛。
本文《RP-HPLC混标加样增量法快速测定食品中的阿斯巴甜和阿力甜》来源于《食品科学》年41卷24期-页，作者：高向阳，张芳。DOI:10./spkx2--20729-。点击下方阅读原文即可查看文章相关信息。
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